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Biotechnology for Biofuels:基于天然降解途径的乙酰丙酮生物合成方法

发布时间:2020-05-19 点击次数:

乙酰丙酮是一种重要的有机合成中间体,广泛应用于贵金属萃取、树脂改性等方面,还可以作为燃料添加剂、染料中间体等。传统方法主要是以石化来源的丙酮和乙烯酮为原料,需要利用贵金属催化剂,在强酸高温条件下获得乙酰丙酮,存在条件苛刻、收率较低、易产生污染等问题,这些问题严重阻碍了乙酰丙酮的进一步应用。为了解决以上问题,本团队研究人员建立了生物合成的方法来获得乙酰丙酮。

图1 本研究提出的乙酰丙酮生物合成途径(实线代表合成途径,虚线代表降解途径)

约翰逊不动杆菌体内存在一种乙酰丙酮裂解酶(Dke1),该菌利用Dke1可以将乙酰丙酮降解为乙酸和甲基乙二醛。受此启发,研究人员设计了以葡萄糖为原料的乙酰丙酮生物合成途径(图1)。通过在大肠杆菌体内引入关键酶、改变外部环境等措施,成功扭转了降解过程,实现了乙酰丙酮的从头生物合成,诱导24h后产量为32mg/L。为了进一步提高产量,通过与已知或推测具有乙酰丙酮裂解酶功能的蛋白进行比较,研究人员深入分析了Dke1的氨基酸序列和三维结构,确定了可能会影响Dke1催化活性的氨基酸位点,对这些潜在位点进行定点突变后获得了一系列突变体,双突变株K15Q/A60D的催化活性比野生型提高了3.8倍。在双突变株催化下,乙酰丙酮在摇瓶水平的产量为116mg/L,5L发酵罐水平的产量达到556mg/L。利用结构模拟和分子对接,发现双突变酶催化活性中心的通路体积有显著增加,进一步揭示了突变引起酶活性提升的可能机制。除了乙酰丙酮,Dke1被证明可作用于2,4-辛二酮、2-乙酰基环己酮、3,5-二庚酮等多种β-二羰基化合物,本研究的结果也为这一类物质的生物合成提供了可能。

图2 突变前后Dke1的结构变化示意图(a为野生型,b为突变型)

相关工作已于近日发表于Biotechnology for Biofuels期刊,并申请了多个发明专利。本研究成果是目前公开的乙酰丙酮生物合成的首次报道。


论文链接:Yifei Zhou, Yamei Ding, Wenjie Gao, Jichao Wang, Xiutao Liu, Mo Xian, Xinjun Feng*, Guang Zhao*. Biosynthesis of acetylacetone inspired by its biodegradation. Biotechnology for Biofuels, 2020, 13:88. DOI: 10.1186/s13068-020-01725-9